導(dǎo)語：如何才能寫好一篇生物細(xì)胞分析，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

[關(guān)鍵詞] 肝細(xì)胞癌；血清；代謝物組；LC-MS；主成分分析；模式識別

[中圖分類號] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] C[文章編號] 1674-4721（2011）06（a）-085-02

目前，臨床上診斷肝癌的主要方法為病理、影像和血清AFP檢查。這些檢測手段中，病理法屬于有創(chuàng)性檢查，對患者造成組織損傷，不能作為常規(guī)檢查方法；B超、CT、磁共振成像對小肝癌灶檢出率較低；血清AFP檢查診斷肝癌靈敏度低，因此，建立一種無損、準(zhǔn)確、靈敏的肝癌診斷方法具有重要的臨床價(jià)值。代謝組學(xué)是一種通過考察生物體系受刺激或擾動(dòng)后代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的變化，并以此來研究生物體系代謝途徑的新技術(shù)[1-2]。代謝組學(xué)作為新興的學(xué)科，已成功應(yīng)用于疾病診斷、藥物作用模型的鑒別和確證、藥物作用機(jī)制研究等領(lǐng)域[3-6]。目前代謝組學(xué)分析中常用的兩種檢測手段是核磁共振（NMR）技術(shù)和質(zhì)譜（MS）及其聯(lián)用技術(shù)。相比于NMR靈敏度低、檢測動(dòng)態(tài)范圍窄等弱點(diǎn)，現(xiàn)代MS技術(shù)的優(yōu)勢是具有很高的靈敏度和專屬性，可以實(shí)現(xiàn)對多個(gè)化合物的同時(shí)快速分析與鑒定，現(xiàn)已成為生物分析中的首選方法。本研究采用LC-MS法檢測肝癌患者和健康人血清中代謝物，比較分析兩組血清代謝物組的差異，同時(shí)利用PCA對MS數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識別，以期建立肝癌的診斷模型。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，Agilent LC/MSD Trap XCT Plus 型質(zhì)譜儀、高壓二元梯度泵、二極管檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、Chemstations化學(xué)工作站等（美國Agilent公司），日立20PR-52D型高速冷凍離心機(jī)，電熱真空干燥箱（上海申光儀器儀表有限公司），KQ- 250 DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），Milli-Q純化水制備系統(tǒng)(Millipore公司)。甲醇、乙腈均為色譜純（美國fisher公司）。

1.2 樣品的采集

分別采集30份男性肝癌患者以及30份健康男性 （無相關(guān)病史的健康人群)受試者靜脈血5 ml 至促凝管中，室溫下靜置1 h后在4℃、13 000 g離心10 min），置-80℃貯存?zhèn)溆谩２裳敖?2 h。肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2001年中國抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)修訂的肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，上清液LC-MSn分析。

1.3 LC-MS 條件

反向液相色譜（RP-LC），色譜柱：Prevail C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：10mM甲酸銨緩沖液（甲酸調(diào)PH 4.0）；B：0.1%甲酸乙腈，A與B梯度洗脫：0～5 min，B%10～30，5～9 min，B% 30～60，9～20 min，B%60～70，20～25 min，B%70～100；柱溫：25°C；流速：0.8 ml/min；質(zhì)譜條件：ESI離子源，離子源溫度350℃，毛細(xì)管電壓3.5 kV，霧化壓力285.8 kPa，霧化壓力60.0 Psi，干燥氣流速11.0 L/min，質(zhì)譜掃描范圍75～800 m/z，正離子檢出模式。

2 結(jié)果

2.1 血清樣品檢測總離子流圖

按照以上實(shí)驗(yàn)方法，對血清樣本進(jìn)行了分析測定，圖1中A、B分別是健康人和肝癌患者血清典型的LC-MS總離子流譜，圖中可見，正常人血清樣本的總離子流圖與肝癌患者血清樣本的總離子流圖有明顯區(qū)別。

A為健康人血清；B為肝癌患者血清

轉(zhuǎn)貼于

2.2 肝癌的生物標(biāo)記物

通過LC-MS檢測，與正常人相比，肝癌患者血清中?；撬岷徒M氨酸含量減少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。?；撬崾侵匾目寡趸镔|(zhì)，曾有研究報(bào)道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中牛磺酸含量沒有改變[7]，但筆者研究發(fā)現(xiàn)?；撬嵩诟伟┗颊哐逯泻繙p少，推測?；撬岬暮颗c肝癌病情程度有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。

2.3 模式識別分析

利用PCA對正常人和肝癌患者兩組血清LC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識別分析，得到相應(yīng)血清標(biāo)本的PCA得分圖（3D PCA Scores plot)。得分圖中每一個(gè)點(diǎn)代表了一個(gè)標(biāo)本，見圖2。從圖2中可以直觀地看出各血清標(biāo)本在空間上的位置以及相互聚合程度，圖2中肝癌和健康人標(biāo)本顯著分離，說明兩者血清代謝物組確實(shí)存在顯著差異。

3 討論

為了探討利用代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合模式識別分析診斷肝癌的可行性，對肝癌患者血清LC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析。結(jié)果表明肝癌患者可與健康人標(biāo)本100%區(qū)分開來，利用基于LC-MS代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合PCA的模式識別方法診斷肝癌診斷結(jié)果可靠。有利于臨床早期診斷、早期治療肝癌。此外，由于代謝組學(xué)反應(yīng)的是基因和蛋白表達(dá)終端的變化、是對基因組學(xué)和蛋白組學(xué)在代謝物研究上的放大，因此利用此技術(shù)診斷疾病更靈敏、快速。

[參考文獻(xiàn)]

[1]羅和古，丁杰，岳廣欣，等.大鼠肝郁脾虛證的代謝組學(xué)研究[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2007，5(3):307-313.

[2]Jeffrey R，Idle1，F(xiàn)rank J，Gonzalez．Metabolomics[J].Cell Metabolism，2007， 12(6):348-350.

[3]Clayton，T.A，Lindon，J.C，Cloarec，O，et al.Pharmacometabonomic phenotyping and personalized drug treatment[J].Nature，2006，440(7087):1073-1077.

[4]黃成鋼.中藥研究的必然趨勢—中藥復(fù)方系統(tǒng)研究[J].中國藥學(xué)雜志，2000，35(7):4331.

[5]周宏偉，譚鳳儀，鐘音，等.代謝組學(xué)及其在微生物領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J].分析化學(xué)，2007，35(2):309-314.

篇2

    新課標(biāo)和新教材最突出特點(diǎn)是以學(xué)生發(fā)展為中心,體現(xiàn)學(xué)生主體地位,面向全體學(xué)生,注重學(xué)生思維能力和學(xué)習(xí)方式的培養(yǎng),倡導(dǎo)探究性學(xué)習(xí)和注重與現(xiàn)實(shí)生活的聯(lián)系。所以在課堂教學(xué)設(shè)計(jì)中筆者采用以學(xué)生發(fā)展為本的主體性教學(xué)模式,從學(xué)生的認(rèn)知水平出發(fā),結(jié)合教學(xué)內(nèi)容,精心設(shè)計(jì)問題,營造探究氛圍,使學(xué)生在觀察、討論、探究、合作交流中相互啟迪、自主學(xué)習(xí)、構(gòu)建模型。

    二、教學(xué)分析

    1.教材分析

    “物質(zhì)出入細(xì)胞的方式”是浙科版普通高中課程標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)教科書生物必修1《分子與細(xì)胞》的第三章第二節(jié)的內(nèi)容。第二章已經(jīng)介紹了細(xì)胞膜的化學(xué)組成和細(xì)胞膜的功能,這一節(jié)是在此基礎(chǔ)上探討細(xì)胞膜控制物質(zhì)進(jìn)出的幾種方式,在細(xì)胞膜的亞顯微結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)之后,帶領(lǐng)學(xué)生繼續(xù)探究細(xì)胞膜控制物質(zhì)進(jìn)出功能的方式和原理。這樣的編排符合學(xué)生認(rèn)知規(guī)律,有助于幫助學(xué)生建立結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)。

    2.學(xué)情分析

    通過前幾章節(jié)的學(xué)習(xí),學(xué)生對于細(xì)胞的分子組成、基本結(jié)構(gòu)和探究的基本步驟已有了一定的認(rèn)識,能理解細(xì)胞膜是系統(tǒng)的邊界,并且大部分學(xué)生已經(jīng)對生物有了較濃厚的學(xué)習(xí)興趣,很渴望在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探究物質(zhì)是怎樣進(jìn)出細(xì)胞的,有哪些方式等有關(guān)細(xì)胞功能方面的知識。

    3.教學(xué)重難點(diǎn)

    (1)教學(xué)重點(diǎn):比較物質(zhì)出入細(xì)胞的各種方式的異同。

    (2)教學(xué)難點(diǎn):理解滲透作用原理。

    三、教學(xué)目標(biāo)

    1.知識目標(biāo)

    (1)簡述擴(kuò)散的特點(diǎn)。

    (2)闡明滲透的概念及原理。

    (3)比較說明紅細(xì)胞吸水與失水的原因;概述被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的概念;比較擴(kuò)散、易化擴(kuò)散和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。

    2.能力目標(biāo)

    (1)學(xué)會(huì)綜合運(yùn)用比較、分析、歸納、綜合等科學(xué)思維方法。

    (2)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),逐步領(lǐng)悟探究過程的一般方法與基本思想,培養(yǎng)自身的科學(xué)探究能力以及語言表達(dá)的能力。

    (3)通過構(gòu)建模型和概念圖,提高知識建構(gòu)能力。

    3.情感、態(tài)度與價(jià)值觀目標(biāo)

    (1)通過分析擴(kuò)散和滲透作用的過程,滲透生命活動(dòng)不斷發(fā)展變化以及適應(yīng)的特性,逐步學(xué)會(huì)自覺地利用發(fā)展變化的觀點(diǎn)認(rèn)識生命。

    (2)領(lǐng)悟科學(xué)探究思想,體驗(yàn)探究活動(dòng)中的成就感。

    (3)通過探討問題,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)合作意識和實(shí)事求是地對待實(shí)驗(yàn)結(jié)果的態(tài)度。

    四、教學(xué)策略與手段

    (1)改變過去單純的教師講授和學(xué)生接受的教學(xué)方式,以問題探究教學(xué)為主線,教師通過多媒體創(chuàng)設(shè)問題情境,引導(dǎo)學(xué)生運(yùn)用討論法、實(shí)驗(yàn)法、學(xué)案導(dǎo)學(xué)、模型建構(gòu)等方法開展學(xué)習(xí),充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性,發(fā)揮學(xué)生主體的作用。

    (2)課前準(zhǔn)備:

    ①學(xué)生預(yù)習(xí)本節(jié)課相關(guān)知識,提出相關(guān)問題;

    ②教師針對教學(xué)設(shè)計(jì)準(zhǔn)備好相關(guān)的多媒體課件、學(xué)案,實(shí)驗(yàn)所需的材料和用具。

    五、教學(xué)過程

    1.導(dǎo)課

    教師組織引導(dǎo)學(xué)生思考(多媒體展示不同物質(zhì)通過不含蛋白質(zhì)的脂雙層):

    (1)什么樣的分子能夠通過脂雙層?什么樣的分子不能通過?

    (2)氨基酸不能通過無蛋白質(zhì)的脂雙層,但是能進(jìn)出細(xì)胞的原因是什么?

    學(xué)生活動(dòng):學(xué)生觀察,思考問題,根據(jù)教師引導(dǎo)總結(jié)出不同物質(zhì)通過細(xì)胞膜的幾種方式。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:創(chuàng)設(shè)問題情境,學(xué)生主動(dòng)參與學(xué)習(xí)過程,激發(fā)學(xué)習(xí)興趣。

    2.學(xué)習(xí)擴(kuò)散

    教師組織引導(dǎo)學(xué)生親手實(shí)驗(yàn)將墨水滴到燒杯中并觀察現(xiàn)象,并引導(dǎo)學(xué)生討論什么是擴(kuò)散。

    學(xué)生活動(dòng):學(xué)生實(shí)驗(yàn),觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象,討論、交流。

    師生共同總結(jié)出擴(kuò)散是分子從高濃度處向低濃度處運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:學(xué)生實(shí)驗(yàn),吸引學(xué)生注意力,體現(xiàn)學(xué)生在學(xué)習(xí)中的主體地位。

    3.學(xué)習(xí)滲透

    教師演示實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)裝置如圖1所示。

    教師設(shè)計(jì)問題串:

    (1)漏斗的液面為什么上升?

    (2)如果用一層紗布代替玻璃紙,液面還會(huì)升高嗎?

    (3)如果燒杯中也是同樣濃度的蔗糖溶液,結(jié)果會(huì)怎么樣?

    學(xué)生在教師的指導(dǎo)下歸納出產(chǎn)生滲透現(xiàn)象兩個(gè)必要條件以及滲透的方向是從低濃度溶液到高濃度溶液。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:通過觀察演示實(shí)驗(yàn),學(xué)生經(jīng)歷“現(xiàn)象——問題——分析——結(jié)論”,主動(dòng)構(gòu)建出滲透作用的條件,提高歸納總結(jié)的能力。

    教師通過多媒體動(dòng)畫演示微觀展示滲透實(shí)驗(yàn)。

    問題探究:

    (1)滲透是水分子跨過膜的擴(kuò)散。擴(kuò)散的方向是怎么樣的?

    (2)那么滲透作用與擴(kuò)散現(xiàn)象相矛盾嗎?

    學(xué)生活動(dòng):思考、回顧前面擴(kuò)散有關(guān)知識,通過相互討論在教師指導(dǎo)下得出回答滲透是水分子跨過膜的擴(kuò)散。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:學(xué)生在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上通過多媒體的清晰展示,清楚觀察到了微觀的滲透現(xiàn)象,使抽象的知識具體化,從而得出滲透的概念,突破難點(diǎn)。

    4.學(xué)習(xí)被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)

    教師通過多媒體動(dòng)畫演示氧和二氧化碳進(jìn)出細(xì)胞的現(xiàn)象。創(chuàng)設(shè)問題情境:給出擴(kuò)散的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),請學(xué)生分析數(shù)據(jù)(表1),構(gòu)建數(shù)學(xué)模型,繪出坐標(biāo)曲線。

    學(xué)生活動(dòng):建構(gòu)模型繪出曲線(圖2)。

    教師用多媒體演示展示葡萄糖進(jìn)入紅細(xì)胞的現(xiàn)象。創(chuàng)設(shè)問題情境:給出葡萄糖跨紅細(xì)胞膜的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(表2),請學(xué)生分析數(shù)據(jù),構(gòu)建數(shù)學(xué)模型,繪出曲線。

    學(xué)生活動(dòng):建構(gòu)模型繪出曲線。

    教師組織引導(dǎo)學(xué)生觀察曲線后,評價(jià)擴(kuò)散和易化擴(kuò)散有何異同點(diǎn)。

    學(xué)生歸納總結(jié)。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:用多媒體演示物質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)母鞣N方式,直觀形象表現(xiàn)出事物的空間中的關(guān)系。學(xué)生構(gòu)建模型,需要進(jìn)行表格與曲線的相互轉(zhuǎn)換,使抽象的問題直觀化、具體化,能夠變抽象思維為形象思維,有助于把握問題的本質(zhì)。

    5.學(xué)習(xí)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)

    教師組織引導(dǎo),創(chuàng)設(shè)問題情境:

    (1)海帶中碘的濃度高出海水中碘濃度的200倍,但是海帶照樣從海水中吸收碘,由低濃度一側(cè)向高濃度一側(cè)運(yùn)輸。

    (2)人的紅細(xì)胞和血漿中的各種離子濃度如下頁表3所示。

    以上兩種情況說明細(xì)胞對離子的吸收是從低濃度到高濃度,這種運(yùn)輸方式是主動(dòng)運(yùn)輸。教師引導(dǎo)學(xué)生根據(jù)資料中思考主動(dòng)運(yùn)輸與被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)相比兩者的區(qū)別。

    學(xué)生活動(dòng):思考、討論回答,總結(jié)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的特點(diǎn)。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:創(chuàng)設(shè)問題情境,自然引入主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn),提高學(xué)習(xí)興趣。

    師生共同小結(jié):設(shè)計(jì)表格對擴(kuò)散、易化擴(kuò)散、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)行比較。

    6.課堂反饋

    教師組織引導(dǎo)一:實(shí)驗(yàn)探究:現(xiàn)有兩瓶沒有標(biāo)簽的蔗糖溶液,請學(xué)生利用所提供的材料(半透膜、漏斗、燒杯、橡皮筋),根據(jù)今天學(xué)習(xí)的知識,設(shè)計(jì)一種實(shí)驗(yàn)方案,比較兩瓶溶液濃度的高低,并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及得出相應(yīng)結(jié)論。

    學(xué)生活動(dòng):分組討論、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:充分發(fā)揮自身自主探究能力,培養(yǎng)自身的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力,逐步領(lǐng)悟探究過程的一般方法與基本思想,提高語言表達(dá)、分析歸納的能力。

    教師組織引導(dǎo)二:建構(gòu)模型:請嘗試畫圖表示隨氧氣濃度與離子運(yùn)輸速率的關(guān)系,并分析曲線各階段的限制因素。

    學(xué)生活動(dòng):繪制曲線圖(圖4)。

    教學(xué)設(shè)計(jì)意圖:通過模型建構(gòu)復(fù)習(xí)鞏固知識,突出教學(xué)難點(diǎn)。

    六、問題研討

篇3

[關(guān)鍵詞] 翼狀胬肉；角膜緣干細(xì)胞；生物羊膜；淚膜破裂時(shí)間

[中圖分類號] R473.77 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2013）06（c）-0043-02

翼狀胬肉是局部球結(jié)膜纖維血管組織增生并侵犯角膜的常見眼表疾病，不僅影響美觀，還常伴眼紅、異物感等不適癥狀。目前治療以手術(shù)為主。為探討初發(fā)性翼狀胬肉采用手術(shù)切除聯(lián)合生物羊膜移植及自體角膜緣干細(xì)胞移植治療的臨床療效，該研究對自體角膜緣干細(xì)胞移植及生物羊膜移植治療翼狀胬肉這兩種主流手術(shù)方法進(jìn)行分析，探討其臨床療效，現(xiàn)對該院2009年5月―2011年3月住院初發(fā)性翼狀胬肉病例73例進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院住院初發(fā)性翼狀胬肉病例73例（79眼），隨機(jī)分為2組。自體角膜緣干細(xì)胞移植組35例（39眼），其中男17例20眼，女18例19眼，年齡38～65（46.7±6.8）歲；胬肉頭部侵入角膜緣約2～4 mm，平均（2.6±0.4）mm。羊膜移植組38例（40眼），其中男20例20眼，女18例20眼，年齡36～68歲（44.5±7.4）歲；胬肉頭部侵入角膜緣約2～4 mm，平均（2.5±0.5）mm。

1.2 淚膜穩(wěn)定性測定（BUT）

熒光素鈉滴入患者結(jié)膜囊后，在裂隙燈下用鈷藍(lán)濾光片觀察一次瞬目到淚膜出現(xiàn)干斑所需要的時(shí)間。分別測量3次取平均值。

1.3 羊膜的取材與規(guī)格

采用成品獨(dú)立包裝的羊膜片。國食藥監(jiān)械字20043061180號，產(chǎn)品批準(zhǔn)文號：規(guī)格：面積2.5 cm×2.5 cm，厚度0.1～0.3 mm，上皮面向上貼附于濾紙上。手術(shù)時(shí)用生理鹽水復(fù)水10 min即可使用。

1.4 手術(shù)方法

1.4.1 角膜緣干細(xì)胞移植組 ①胬肉切除：0.5%愛爾卡因滴眼液表麻術(shù)眼，顯微鏡下操作，胬肉浸潤麻醉采用0.1%腎上腺素+2%利多卡因適量進(jìn)行，于胬肉頸部剪開球結(jié)膜，分離時(shí)向上、下方及鼻側(cè)分離。胬肉頭部前0.5 mm剖切，自角膜面完整干凈的剔除胬肉頭部，分離胬肉頸部至半月皺襞，將胬肉組織剪除。將鞏膜表面筋膜組織清除，燒灼止住出血點(diǎn)出血。②角膜緣干細(xì)胞移植：將術(shù)眼上方球結(jié)膜與其下筋膜分離，切取一結(jié)膜瓣，要比受區(qū)結(jié)膜缺損大小形狀略大，向下分離至角膜緣內(nèi)1mm處剪除。平鋪此帶角膜緣干細(xì)胞的結(jié)膜瓣于受區(qū)鞏膜表面。10-0尼龍線帶鞏膜淺層間斷縫合固定角膜緣及植片兩側(cè)，余植片與結(jié)膜殘端間斷縫合。取材區(qū)結(jié)膜無需縫合自行修復(fù)。

1.4.2 羊膜移植組 ①胬肉切除：同角膜緣干細(xì)胞組。②羊膜移植：剪取復(fù)水后的羊膜，t要略>缺損范圍1 mm大小，將上皮面朝上緊貼于暴露的鞏膜區(qū)，球結(jié)膜和羊膜用10-0尼龍線間斷對位縫合，對多余的羊膜進(jìn)行修剪， 中央縫合羊膜植片2針固定在淺層鞏膜上，角膜緣固定2針。

兩組手術(shù)術(shù)前滴雙氯芬酸鈉眼液及典必殊眼液3～5 d，4次/d。術(shù)后術(shù)眼涂四環(huán)素可的松眼膏，繃帶加壓24 h后，典必殊眼液點(diǎn)眼，6次/d，持續(xù)1周后逐漸減量。術(shù)后8～10 d拆除縫線。同時(shí)兩組患者于術(shù)后1周、1個(gè)月及3個(gè)月檢查淚膜破裂時(shí)間。

1.5 療效評定標(biāo)準(zhǔn)

痊愈：術(shù)區(qū)光滑潔凈，角膜創(chuàng)面上皮覆蓋，結(jié)膜無充血平整，無胬肉增生和新生血管；復(fù)發(fā)：結(jié)膜明顯充血，局部增厚，角膜創(chuàng)面有胬肉增生及新生血管。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

術(shù)后2～3 d兩組患者均有不同程度的植片及結(jié)膜充血、異物刺激感和水腫， 4～5 d后逐漸減輕。自體角膜緣干細(xì)胞移植組術(shù)后創(chuàng)面愈合時(shí)間3～7（4.4±0.8）d。生物羊膜移植組術(shù)后創(chuàng)面愈合時(shí)間5～8（6.5±0.6）d。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.34， P

篇4

【關(guān)鍵詞】生物技術(shù)；現(xiàn)狀；特點(diǎn)；環(huán)境保護(hù)；應(yīng)用

由于工業(yè)化進(jìn)程的飛速發(fā)展，工業(yè)“三廢”、城市汽車尾氣，飲用水的的污染，生態(tài)環(huán)境受到嚴(yán)重破壞。甚至影響到了人們的日常生活。人們疾病發(fā)病率急劇上升。因此加大對環(huán)境保護(hù)工作的投入是當(dāng)前擺在面前十分嚴(yán)峻的問題，許多傳統(tǒng)的環(huán)保工藝處理技術(shù)已不能適應(yīng)現(xiàn)在環(huán)保工作的需求，迫切需要一種新的環(huán)保治理方式。而現(xiàn)代生物技術(shù)以其眾多的優(yōu)點(diǎn)，正越來越多地被應(yīng)用到了環(huán)境保護(hù)處理過程當(dāng)中。

一、我國現(xiàn)代環(huán)境面臨的現(xiàn)狀

當(dāng)前，我國環(huán)境保護(hù)工作面臨的形勢十分嚴(yán)峻，集中表現(xiàn)在工業(yè)化學(xué)污染嚴(yán)重、農(nóng)用化肥及農(nóng)藥污染、水資源嚴(yán)重短缺、飲用水源遭到污染情況嚴(yán)重、土地沙漠化趨勢比較明顯、耕地面積大量流失、森林草原等植被遭到嚴(yán)重破壞、許多珍稀物種動(dòng)植物滅絕等等。這些問題都是事關(guān)我國經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展的速度和水平及人民生產(chǎn)生活狀況，必須得到我們的重視。

二、現(xiàn)代生物技術(shù)的特點(diǎn)

現(xiàn)代生物技術(shù)在生態(tài)環(huán)境中應(yīng)用的很廣泛，是因?yàn)?，它有?dú)特的優(yōu)點(diǎn)：1、以生物為對象，不依賴地球上的有限資源，而針對再生資源的利用；2、在常溫常壓下進(jìn)行，過程簡單化，可持續(xù)操作，可以節(jié)約能源，減少環(huán)境污染；3、開辟了生產(chǎn)高純度、優(yōu)質(zhì)、安全可靠的生物制品的新途徑4、可解決常規(guī)技術(shù)和傳統(tǒng)方法下不能解決的問題；5、可定向地按人們的需要?jiǎng)?chuàng)造新物種、新品種和其他有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的生物類型。

三、現(xiàn)代生物類型在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用

因?yàn)楝F(xiàn)代生物可以有效地降低環(huán)境保護(hù)工作中的成本，不受天氣氣候、場地等的影響，可以隨時(shí)發(fā)揮作用，可以創(chuàng)造可再生資源，能夠徹底去除有害物質(zhì)等，它憑借著這些優(yōu)點(diǎn)，在環(huán)境保護(hù)中起到重要的作用?？梢允宫F(xiàn)代生物技術(shù)的運(yùn)用范圍迅速擴(kuò)展，可以對農(nóng)村中的牲畜糞進(jìn)行加工，產(chǎn)生清潔能源，不會(huì)對環(huán)境造成污染，徹底去除污染物，提高了環(huán)境保護(hù)的工作。

1、對污水的生物凈化。要用生物技術(shù)對廢水進(jìn)行處理，可以應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)、PCR技術(shù)、電子顯微技術(shù)、基因差異顯示技術(shù)、生物傳感器等現(xiàn)代生物技術(shù)對環(huán)境進(jìn)行檢測與評估。應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)對環(huán)境中的農(nóng)藥及其一些代謝物一一項(xiàng)新技術(shù)。國內(nèi)外根據(jù)這項(xiàng)技術(shù)開發(fā)出了殺菌劑、除草劑、殺蟲劑等農(nóng)藥和抗菌素等對污染物的酶聯(lián)免疫的分析方法。而我國也在這方面取得了一些新發(fā)展，例如開展了生物監(jiān)測方法的研究，研究了各種生物的綜合指標(biāo)，利用生物監(jiān)測技術(shù)評價(jià)環(huán)境質(zhì)量，利用冷凍干燥且發(fā)光的細(xì)菌，根據(jù)它的發(fā)光強(qiáng)度變化的特點(diǎn)來斷定水質(zhì)污染的程度，從而研究提出了上海蘇州河水水質(zhì)發(fā)光細(xì)菌測試和評價(jià)方法。污水中的有毒物質(zhì)的成分十分復(fù)雜，包括各種酚類、氰化物、重金屬、有機(jī)磷、有機(jī)汞、有機(jī)酸、醛、醇及蛋白質(zhì)等等，是環(huán)境污染中最難治理并且必須治理的一種污染形勢。微生物通過自身的生命活動(dòng)可以解除污水的毒害作用，從而使污水中的有毒物質(zhì)轉(zhuǎn)化為有益的無毒物質(zhì)，使污水得到凈化。應(yīng)用遺傳工程的技術(shù)構(gòu)建出符合人們需要的微生物高效菌和可以講解很多種污染物功能的超級菌，從而提高對污染物的講解能力，加快講解的速度，增強(qiáng)凈化污水的能力。當(dāng)今固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)處理污水就是生物凈化污水的方法之一。固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是酶工程技術(shù)。固定化酶又稱水不溶性酶，是通過物理吸附法或化學(xué)鍵合法使水溶性酶和固態(tài)的不溶性載體相結(jié)合，將酶變成不溶于水但仍保留催化活性的衍生物，微生物細(xì)胞是一個(gè)天然的固定化酶反應(yīng)器，用制備固定化酶的方法直接將微生物細(xì)胞固定，即是可催化一系列生化反應(yīng)的固定化細(xì)胞。運(yùn)用固定化酶和固定化細(xì)胞可以高效處理廢水中的有機(jī)污染物、無機(jī)金屬毒物等。

2、對于那些固體廢物，我們可以產(chǎn)用生物講解的方法，例如焚燒、熱處理等，這種辦法具有成本低、操作簡單、容易管理、運(yùn)行費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)。這也可以成為“生物反應(yīng)堆”，與傳統(tǒng)的挖坑填埋相反，可以允許適量的水分進(jìn)入，增加濕度，微生物可以很好地生長和繁殖，從而加速了廢物的降解和穩(wěn)定。又分為好氧生物處理，這是指利用好氧生物在有氧的條件下新陳代謝，利用好氧生物技術(shù)將廢物處理；壞氧生物處理，是指壞氧生物在無氧的條件下生長代謝作用處理廢物；準(zhǔn)好氧生物處理，這是使填埋場里具有某種好氧條件，靠垃圾分解產(chǎn)生的發(fā)酵熱造成內(nèi)外溫差，空氣可以自然的通過填埋體，促進(jìn)垃圾的分解和穩(wěn)定，它不需要通風(fēng)，節(jié)省能量，減少對地下水的污染，可以使危險(xiǎn)氣體例如CH4、H2S等產(chǎn)量降低等；混合生物技術(shù)，是把好氧和壞氧生物技術(shù)綜合起來，它主要的特點(diǎn)就是增加了揮發(fā)有機(jī)酸對空氣具有危險(xiǎn)性的污染物的講解，并且降解的速度很快。

3、生物修復(fù)技術(shù)出現(xiàn)在80年代以來的治理環(huán)境污染的生物工程技術(shù)，主要是利用了生物本身的獨(dú)特分解有機(jī)物的能力，去消除污染環(huán)境中的污染物，達(dá)到消除污染的目的。它包括微生物修復(fù)和植物修復(fù)。人們可以利用植物對某些污染物進(jìn)行吸收，作為這些污染物的生存介質(zhì)，達(dá)到凈化的功能，而微生物被運(yùn)用在去除土壤中的重金屬污染、石油污染等多種污染物，具有典型的處理速度快、無二級污染、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等特點(diǎn)。

4、環(huán)境生物技術(shù)應(yīng)用在預(yù)防污染上也十分廣泛。利用分子遺傳技術(shù)可以將生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢棄物直接轉(zhuǎn)化為新能源或副產(chǎn)品，例如微生物化肥，利用DNA重組及蛋白質(zhì)工程技術(shù)快速生成的酶，把它應(yīng)用在生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，減少使用化學(xué)無極品從而達(dá)到清潔生產(chǎn)的目的；利用分子生物種群、基因技術(shù)、DNA修復(fù)可以改變一些物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，可以加大降解性或加速自然講解的速度，這種降解途徑徹底，一般不會(huì)帶來副作用；有的是通過共代謝作用，將農(nóng)藥轉(zhuǎn)為了避免負(fù)面效應(yīng)，就需要用基因工程的方法對已知有降解農(nóng)藥作用的微生物進(jìn)行改造，改變其生化反應(yīng)途徑，以希望獲得最佳的降解、除毒效果。例如生物化肥、生物農(nóng)藥、生物可降解塑料膜等大量使用在實(shí)際生活中，取代了化學(xué)制成品農(nóng)藥、化肥的使用。它是無污染的，所以在農(nóng)作物聲中得到了廣泛的應(yīng)用。能降解農(nóng)藥的微生物，有的是通過礦化作用將農(nóng)藥逐漸分解成終產(chǎn)物CO2和H2O，要想徹底消除化學(xué)農(nóng)藥的污染，最好全面推廣生物農(nóng)藥。

四、結(jié)論

我們現(xiàn)在的地球已經(jīng)被我們傷害的遍體鱗傷，我們必須采取最有效又不傷害它的方法來幫地球治療。更新環(huán)保理念，利用生物技術(shù)，我們要把治理變?yōu)樘崆邦A(yù)防的方針。利用新的成果技術(shù)，加強(qiáng)對沒有受到污染的環(huán)境預(yù)防，對那些已經(jīng)受到危害的環(huán)境，要做盡早的處理措施，從根本上解決環(huán)境保護(hù)的問題。隨著我們的環(huán)保意識的逐漸增強(qiáng)，環(huán)境保護(hù)已經(jīng)成為了社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。而現(xiàn)代生物技術(shù)是以集約化、商品化、國際化、集科學(xué)化和環(huán)保化為一體的基本特征，在高新技術(shù)革命中，占有最重要的地位，也必將會(huì)在將來對社會(huì)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。

參考文獻(xiàn)

[1]張偉峰.現(xiàn)代生物技術(shù)在環(huán)境保護(hù)工作中的應(yīng)用[J].時(shí)代報(bào)告,2011（9）

[2]趙淑蘭.淺議現(xiàn)代生物技術(shù)在環(huán)境保護(hù)工作中的應(yīng)用[J].科技信息，2010（16）

篇5

一、合理辨別細(xì)胞有絲分裂各時(shí)期圖形及染色體行為

要想合理辨別細(xì)胞有絲分裂各時(shí)期圖形及染色體的行為，第一，需要了解動(dòng)植物細(xì)胞器的中心體.第二，明確動(dòng)物細(xì)胞分裂的后末期現(xiàn)象及一個(gè)細(xì)胞分裂成兩個(gè)細(xì)胞的過程，植物細(xì)胞在分裂末期由中央赤道板位置形成細(xì)胞板，并向周圍進(jìn)行擴(kuò)展，促使一個(gè)細(xì)胞分裂成兩個(gè)細(xì)胞.第三，合理繪制動(dòng)植物細(xì)胞有絲分裂后期圖像，首先，正確畫染色置，確保著絲點(diǎn)靠近兩級.其次，確保染色體形狀、大小及顏色與上面所附著的基因相同.最后，大多數(shù)生物在細(xì)胞的每一級均有成對存在的同源染色體.

例1圖1中表示動(dòng)物細(xì)胞在有絲分裂的分裂期各種距離或長度隨時(shí)間的變化規(guī)律曲線，敘述正確的是（A）

A.曲線a代表兩個(gè)中心體間的距離

B.曲線b代表姐妹染色單體共用的著絲點(diǎn)間的距離

C.曲線c代表染色體與細(xì)胞兩級間的距離

D.曲線d代表染色體紡錘絲的長度

解析由于題中給出從有絲分裂的分裂期開始，兩個(gè)中心體在前期分開，可用a曲線表示.兩個(gè)著絲點(diǎn)是從后期分開，距離從0開始增加，因此10分鐘開始進(jìn)入后期，用c曲線表示著絲點(diǎn)間的距離.同時(shí)商茲舊體向兩極移動(dòng)，所以d曲線表示著絲點(diǎn)距細(xì)胞兩極的距離.附著在著絲點(diǎn)的紡錘絲從前期形成到末期消失，因此b代表紡錘絲的長度.本題的答案為A.

二、正確認(rèn)識與卵細(xì)胞形成過程

與卵細(xì)胞的形成過程既有相同點(diǎn)又有一定的區(qū)別，不同點(diǎn)是在細(xì)胞分裂后期產(chǎn)生，細(xì)胞質(zhì)分裂具有均勻性特點(diǎn).1個(gè)精原細(xì)胞能夠分解為4個(gè)，精細(xì)胞分解為的過程不屬于減數(shù)分裂過程.而卵細(xì)胞在形成過程中，細(xì)胞質(zhì)分裂處于不均勻現(xiàn)象，能夠由1個(gè)卵原細(xì)胞分解為3個(gè)極體，形成過程處于無變形階段.兩者的相同點(diǎn)是，染色體行為及染色體、DNA數(shù)量相同.

例2圖2中哪個(gè)細(xì)胞是次級卵母細(xì)胞繼續(xù)分裂過程中染色體平均分配的示意圖（B）

解析試題分析：題中圖A是卵原細(xì)胞在減數(shù)分裂第一次分裂過程中處于后期的初級卵母細(xì)胞圖，判斷依據(jù)是每個(gè)四分體中的同源染色體已彼此分開，開始分別移向細(xì)胞兩極，但細(xì)胞質(zhì)的分配是不平均的；圖B是減數(shù)第二次分裂后期的次級卵母細(xì)胞圖，判斷依據(jù)是著絲點(diǎn)已分裂；圖C是精原細(xì)胞在減數(shù)分裂第一次分裂后期的初級精母細(xì)胞圖，判斷依據(jù)是同源染色體已彼此分裂，正在移向細(xì)胞兩極，但細(xì)胞質(zhì)的分配是平均的；圖D有兩種可能，一種可能是精原細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂第二次分裂后期圖，第二種可能是卵原細(xì)胞減數(shù)分裂過程中第一極體的分裂后期圖.故答案是B.

三、明確有絲分裂及減數(shù)分裂圖形的區(qū)別

首先，需要對是否是減數(shù)的第一次分裂進(jìn)行判斷，對有絲分裂圖像中的減數(shù)第一次分裂、第二次分裂及有絲分裂圖像進(jìn)行比較，在對第一次分裂的染色體進(jìn)行判斷時(shí)，需要結(jié)合染色體的行為來進(jìn)行.其次，對減數(shù)第二次分裂及有絲分裂進(jìn)行比較.最后，對細(xì)胞中染色體的奇數(shù)及細(xì)胞質(zhì)分裂不均勻等現(xiàn)象進(jìn)行判斷.

例3二倍體生物細(xì)胞正在進(jìn)行著絲點(diǎn)分裂時(shí)，敘述正確的是（C）.

A.細(xì)胞中一定不存在同源染色體

B.著絲點(diǎn)分裂一定導(dǎo)致DNA數(shù)目加倍

C.染色體DNA一定由母鏈和子鏈組成

D.細(xì)胞中染色體數(shù)目一定是其體細(xì)胞的2倍

二倍體生物細(xì)胞進(jìn)行著絲點(diǎn)分裂時(shí)，細(xì)胞處于有絲分裂后期或減數(shù)第二次分裂后期，前者細(xì)胞中存在同源染色體；著絲點(diǎn)分裂導(dǎo)致染色體數(shù)目加倍，但DNA數(shù)目不變；DNA復(fù)制方式為半保留復(fù)制，則DNA中一定有一條母鏈和一條子鏈；有絲分裂后期染色體數(shù)目增加，是體細(xì)胞染色體數(shù)目的2倍，減數(shù)第二次分裂后期，染色體數(shù)也暫時(shí)加倍，但與體細(xì)胞中染色體數(shù)相等.故答案選C.

篇6

[關(guān)鍵詞]干細(xì)胞；人牙周膜干細(xì)胞；免疫磁珠；流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)；免疫細(xì)胞化學(xué)

[中圖分類號]R783.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455（2008）05-04

Isolation, identification and bionomics of human periodontal ligament stem cells

PAN Feng1,DING Yin1,WANG Guang1,ZHAO Yu2,NI Hua2

(1.Department of Orthodontics,Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,Shaanxi,China; 2.Center of Tissue Engineering, Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University)

Abstract:ObjectiveTo isolate and identify the periodontal ligament stem cells and demonstrate its bionomics. MethodsPDLSCs were isolated by immunomagnetic method. The flow cytometry and immunocytochemistry procedure were used to disclose the cell cycle and surface marker of the PDLSCs.Osteoinduction and adipoinduction were done to conform the multidirectional differentiation of PDLSCs. ResultsThe acquired cells had clonality and low proliferation. Most of the cells were in phase G0 /G1 and there were high expression of CD146 and CD44 on these cells, meanwhile, CD34 and CD45 were of low expression. The cells were Vimentin and STRO-1 positive while their multidirectional differentiation ability was confirmed in vitro. Conclusionimmunomagnetic method was an effective way to isolate and purify the PDLSCs. The acquired cells showed the characteristics of stem cells.

Key words:stem cell;human periodontal ligament stem cell;immunomagnetic beads;flow cytometry;immunocytochemistry

研究證實(shí)牙周膜內(nèi)存在具有橫向分化能力的干細(xì)胞(牙周膜干細(xì)胞)，在體外微環(huán)境作用下還可分化為成牙骨質(zhì)細(xì)胞或成骨細(xì)胞[1-2]。因此，牙周膜干細(xì)胞（PDLSCs）作為一種新發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞，在牙周組織工程研究中有較大的應(yīng)用前景。但是牙周膜組織量小、分離困難，一直成為制約牙周膜干細(xì)胞研究的重要原因。已有的克隆篩選法操作程序繁瑣，周期較長[1]，因此需要尋找簡便、快捷的篩選方法來分離牙周膜干細(xì)胞。本研究應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)對人牙周膜干細(xì)胞進(jìn)行篩選，并擴(kuò)增培養(yǎng)，通過對牙周膜干細(xì)胞生長曲線、克隆形成率、細(xì)胞周期、細(xì)胞表面抗原標(biāo)記物測定及多向分化能力的研究對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究，以期建立一種便捷有效的分離方法并明確牙周膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性，為進(jìn)一步研究牙周損傷的發(fā)病機(jī)理及臨床治療提供基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備：α-MEM培養(yǎng)基（Gibco，美國），羊抗小鼠磁珠試劑盒（Dynalbiotech，美國)，基質(zhì)蛋白-l單克隆抗體(STRO-1，R&D，美國)， ABC型免疫組化檢測試劑盒(Dkao，美國)；小鼠抗人波形絲蛋白單抗(Vimentin，Dkao，美國)；CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人單克隆抗體（Beckmen Coulter，美國）；CO2孵箱(Heraeus，德國)；YJ-875型超靜工作臺(蘇州凈化設(shè)備廠，中國)；流式細(xì)胞分析儀(Beckmen Coulter，美國)；倒置相差顯微鏡及照相系統(tǒng)(Olympus，日本)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 取材及細(xì)胞培養(yǎng)：收集臨床拔除的正常人牙周健康、無齲的新鮮第3磨牙，刮取根中1/3牙周膜組織，移入10cm無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，滴加少許α-MEM培養(yǎng)液保持組織濕潤，銳性分離牙周膜組織約1mm3組織塊，將分離的組織塊以1mm間距平鋪于6孔板內(nèi)，以無菌蓋玻片覆蓋組織塊，加入培養(yǎng)液(含100ml/L 胎牛血清，100μmol/L2抗壞血酸，2mmol/L2谷胺酰胺，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素的α-MEM 培養(yǎng)液)，置入37℃、50ml/L CO2的孵箱中培養(yǎng)，待多數(shù)組織塊周圍有細(xì)胞游出后去除蓋玻片，常規(guī)培養(yǎng)，每3天換液1次，細(xì)胞生長達(dá)80%匯合時(shí)傳代。

1.2.2磁珠分離篩選牙周膜干細(xì)胞：將5μl磁珠劇烈振蕩后移入離心管內(nèi)，加入5ml含1％胎牛血清的PBS沖洗，放置于磁力架上靜置2min后去上清，重復(fù)一次后重懸，置4℃?zhèn)溆?。收集?代人牙周膜細(xì)胞1×108個(gè)，以含1％胎牛血清的PBS重懸，加入小鼠抗人STRO-1抗體，4℃孵育60min，每隔10min輕振以防沉淀。以含1％胎牛血清的PBS清洗3次，去除殘留抗體后重懸并加入磁珠，4℃孵育30min，每5min輕振一次。離心，去除含空白磁珠的上清液，以含1％胎牛血清的PBS重懸，將離心管置于磁力架上2min，緩慢棄除上清及未與磁珠結(jié)合的細(xì)胞。以含1％胎牛血清的PBS再次重懸并清洗與磁珠結(jié)合的細(xì)胞2次，棄上清，加入磁珠分離液，輕晃均勻2min后置于磁力架上2min，取上清液，重復(fù)2次以去除殘存磁珠，離心，加入5ml含10％胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)液，重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×104/ml接種于6孔板內(nèi)，37℃、50ml/L CO2的孵箱中培養(yǎng)。

1.3 牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究

1.3.1細(xì)胞生長曲線測定：分別取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞及牙周膜細(xì)胞，以1×103cells/孔接種于96孔塑料板，每組3孔，隔日換液。每天取一組，MTT法測各孔OD值，連續(xù)測10天，以時(shí)間為橫軸、細(xì)胞數(shù)為縱軸繪制生長曲線。

1.3.2 克隆形成率測定：將收集的對數(shù)生長期牙周膜細(xì)胞的培養(yǎng)上清1 500rpm離心10min，經(jīng)0.22μm直徑的小濾器過濾后，與培養(yǎng)基以l:l比例混合作為適應(yīng)性培養(yǎng)基。取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至10～15個(gè)/ml，100μ1/孔接種于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)12h后標(biāo)記單個(gè)細(xì)胞孔，并補(bǔ)液至200μ1/孔，5天換液，光鏡下觀察克隆形成情況。

1.3.3 流式細(xì)胞儀分析

1.3.3.1細(xì)胞周期分析：取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞密度為1×107/ml， PBS清洗2次，加入0.01mol/LPBS重懸，再加入預(yù)冷的無水乙醇2ml吹打混勻，4℃過夜，離心棄乙醇，0.01mol/LPBS清洗2次，加入5ml/L碘化丙錠1ml，4℃30min，過300目的尼龍篩網(wǎng)，流式細(xì)胞儀上機(jī)，進(jìn)行細(xì)胞周期檢測。

1.3.3.2表面抗原測定：取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞, 棄去培養(yǎng)液，PBS清洗兩次，以含0.25% 胰蛋白酶的PBS液消化5 min，制成單細(xì)胞懸液，再以含2%牛血清白蛋白和0.1%偶氮鈉的磷酸鹽緩沖液(流式緩沖液)沖洗細(xì)胞, 調(diào)整細(xì)胞密度為3.0×109/L，每個(gè)Eppendof管加100μL細(xì)胞懸液，室溫下分別與CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人單克隆抗體5μL避光孵育15min，再以流式緩沖液清洗細(xì)胞，1 000rpm離心5min，將細(xì)胞重懸于含1%多聚甲醛的流式緩沖液0.5ml固定。使用同型對照單克隆抗體確定背景標(biāo)記。用流式細(xì)胞儀分析熒光細(xì)胞，專用配套軟件計(jì)算細(xì)胞表面抗原陽性率，單位用%表示。

1.3.3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色：取篩選培養(yǎng)的PDLSCs制備細(xì)胞爬片， 免疫細(xì)胞化學(xué)ABC法進(jìn)行STRO-1及Vimentin染色，陰性對照以PBS替代一抗，進(jìn)行細(xì)胞來源及表達(dá)檢測，光鏡下觀察。

1.3.3.4體外多向誘導(dǎo)分化：①礦化誘導(dǎo)：取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為2×104/ml接種于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)24h后換礦化誘導(dǎo)液(100μg/ml鏈霉素、100U/ml青霉素、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉、50μg/ml維生素C、1×10-8mol/L地塞米松、10ml/L胎牛血清、α-MEM培養(yǎng)液)培養(yǎng)，隔日換液。培養(yǎng)3周后吸棄培養(yǎng)液, PBS清洗, 95%酒精固定10min ,PBS清洗2次,加入0.1%茜素紅(Alizarin Red-S)室溫染色30min，去離子水清洗3次，光鏡下觀察。②成脂誘導(dǎo)：取篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/ml接種于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)24h后換成脂誘導(dǎo)液（地塞米松10-6mol/L、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤0.5mmol/L、胰島素10mg/L、消炎痛100mmol/L、α-MEM培養(yǎng)液）培養(yǎng)，隔日換液。培養(yǎng)3周后吸棄培養(yǎng)液，PBS清洗，10％中性甲醛固定10min，PBS清洗2次，油紅O染色10min，去離子水清洗3次，鏡下觀察。

2結(jié)果

2.1形態(tài)學(xué)觀察：所篩選細(xì)胞大部分呈類梭形，核為卵圓形、位于胞質(zhì)中央，似成纖維樣細(xì)胞（如圖1）。

2.2 細(xì)胞生長曲線測定：牙周膜細(xì)胞及牙周膜干細(xì)胞生長曲線均呈倒“S”形，在接種后1天兩者細(xì)胞量均減少，自第2天起，細(xì)胞生長均加速，第8天達(dá)到生長高峰，進(jìn)入“平臺期”，此后，細(xì)胞生長速度減慢。總體而言，干細(xì)胞生長速度明顯低于牙周膜細(xì)胞（如圖2）。

2.3 牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)特性研究

2.3.1 克隆形成率：10～12天有細(xì)胞克隆形成，鏡下觀細(xì)胞呈集落狀生長，細(xì)胞形態(tài)成梭形，體積較小，排列緊密，中心細(xì)胞界限不清，呈圓形或不規(guī)則形狀，周邊細(xì)胞呈梭形或多角形。共獲得克隆株43株，克隆形成率為14.93％。

2.3.2細(xì)胞周期分析：細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示：大多數(shù)細(xì)胞處于G0/G1期(78.2％)，即靜止期和DNA合成前期。G2期為2.3％，S期為19.5％。表明細(xì)胞增殖緩慢，大多數(shù)處于靜止期或緩慢增殖期(如圖3)。

2.3.3 細(xì)胞表型特征鑒定：表面抗原CD146和CD44檢測陽性率為92.8％及91.7％，CD34和CD45陽性率為1.6％及2.3％ （如圖4）。

2.3.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色：篩選培養(yǎng)的牙周膜干細(xì)胞中STRO-1及Vimentin均為陽性染色，具有間充質(zhì)干細(xì)胞的特征（如圖5～6）。

2.3.5 成骨誘導(dǎo)：成骨誘導(dǎo)液繼續(xù)培養(yǎng)8天后，細(xì)胞呈復(fù)層生長，局部增厚，12天左右中央出現(xiàn)許多顆粒樣改變，并逐漸連接成片，密度增高。21天左右孔板底部出現(xiàn)肉眼可見針尖大小灰白色小結(jié)節(jié)，并逐漸增大。茜素紅染色可見紅色礦化結(jié)節(jié)（如圖7）。

2.3.6 成脂誘導(dǎo)：經(jīng)成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)至第10天左右，可見細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，較培養(yǎng)初期更為飽滿，至21天時(shí)油紅O染色陽性，細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量脂滴形成（如圖8）。

3討論

以往成體干細(xì)胞的分離純化常用方法有密度梯度離心法、貼壁培養(yǎng)法、克隆化培養(yǎng)篩選，但這些方法操作繁瑣，且所需時(shí)間較長，不利于臨床應(yīng)用。根據(jù)干細(xì)胞表面特異性受體能選擇性結(jié)合或粘附其它信號分子的原理，采用免疫磁珠篩選、流式細(xì)胞分選法分離和鑒定干細(xì)胞己廣泛開展[3,9]。Seo[1]的研究結(jié)果顯示人牙周膜干細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的特異性標(biāo)志STRO-1，并利用免疫磁珠篩選首次成功獲得人牙周膜干細(xì)胞。Gay等[4]使用STRO-1抗體對牙周膜細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記后，通過流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行篩選，獲得27％STRO-1陽性細(xì)胞。在本實(shí)驗(yàn)中，我們通過使用包被二抗的免疫磁珠對復(fù)合STRO-1的牙周膜細(xì)胞進(jìn)行分離純化，獲得牙周膜干細(xì)胞，篩選程序簡單、迅速，細(xì)胞活性保持較好。經(jīng)細(xì)胞生長曲線測定，牙周膜干細(xì)胞較同一來源的牙周膜細(xì)胞生長慢，符合干細(xì)胞慢增殖周期的特點(diǎn)。

克隆形成能力是干細(xì)胞的特點(diǎn)，高秦等[10]對人牙周膜細(xì)胞進(jìn)行了克隆化培養(yǎng)，結(jié)果顯示細(xì)胞培養(yǎng)10～15天有克隆形成，克隆形成率為0.62％。Gay等[4]對牙周膜干細(xì)胞及骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的克隆形成情況進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)牙周膜干細(xì)胞有50個(gè)克隆形成，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞有35個(gè)克隆形成，證實(shí)牙周膜干細(xì)胞有較強(qiáng)的克隆形成能力。成體干細(xì)胞處于由周圍間質(zhì)細(xì)胞及其所分泌的相關(guān)生長因子或配體形成的微環(huán)境中，這些生長因子或配體與干細(xì)胞相互作用，控制干細(xì)胞的更新和分化。故為提高克隆形成率并盡可能的保持純化后的細(xì)胞的未分化狀態(tài)，本研究借鑒了高秦等[10]人牙周膜干細(xì)胞克隆化培養(yǎng)的方法，收集了牙周膜細(xì)胞的培養(yǎng)上清與普通培養(yǎng)基以一定比例混合，制備成適應(yīng)性培養(yǎng)基，對所篩選的牙周膜干細(xì)胞進(jìn)行了克隆化培養(yǎng)，共得到43個(gè)克隆，克隆形成率為14.93％，證實(shí)所獲得細(xì)胞具有干細(xì)胞自我更新的特性。

細(xì)胞周期是反映細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)的重要指標(biāo)。干細(xì)胞是處于相對靜止?fàn)顟B(tài)的一群細(xì)胞，這種慢周期的特點(diǎn)是大多數(shù)成體干細(xì)胞的共同特征[11-12]。但在外界因素作用下，干細(xì)胞周期也會(huì)相應(yīng)變化[13-14]。本研究對所篩選牙周膜干細(xì)胞的細(xì)胞周期分析顯示，與高秦等[10]的結(jié)果有一定差異，可能原因有：①細(xì)胞來源不同，因不同個(gè)體的干細(xì)胞狀態(tài)不會(huì)完全一致；②細(xì)胞獲取方法不同，高秦等通過克隆化培養(yǎng)獲取牙周膜干細(xì)胞，而本研究采用的是免疫磁珠直接篩選，不同的方法導(dǎo)致細(xì)胞所受外界條件刺激的不同，進(jìn)而可能影響到細(xì)胞周期的變化。

目前，學(xué)者們還未找到牙周膜干細(xì)胞的特異性表面抗原標(biāo)記物。Seo等[1]的研究結(jié)果顯示牙周膜干細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原STRO-1及血管周圍細(xì)胞表面標(biāo)記物CD146及CD44。Nagatomo等[15]發(fā)現(xiàn)牙周膜干細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞表面抗原CD105、CD166及STRO-1。Ivanovski等[16]發(fā)現(xiàn)牙周膜干細(xì)胞或骨髓基質(zhì)干細(xì)胞均無CD14、CD45和CD34表達(dá)。高秦等[10,21]研究結(jié)果顯示人牙周膜干細(xì)胞波形蛋白（Vimentin）及STRO-1呈陽性表達(dá)。在實(shí)驗(yàn)中我們對分離培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行了表面抗原測定及免疫細(xì)胞化學(xué)染色，結(jié)果顯示：Vimentin及STRO-l染色陽性，顯示其間充質(zhì)干細(xì)胞來源，此外，流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD44及CD146在牙周膜干細(xì)胞中高表達(dá)，而內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34，造血系細(xì)胞標(biāo)記物CD45的表達(dá)極低，從正反兩方面證實(shí)了以往學(xué)者的結(jié)論。而多向分化研究結(jié)果也證實(shí)牙周膜干細(xì)胞可以經(jīng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞，符合干細(xì)胞特征。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)所篩選培養(yǎng)的人牙周膜干細(xì)胞為多角形、成纖維型細(xì)胞外觀，具備克隆形成能力及慢細(xì)胞周期特點(diǎn)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)CD44、CD146、Vimentin、STRO-1，不表達(dá)CD34、CD45，均與文獻(xiàn)報(bào)道一致。此外，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，所培養(yǎng)細(xì)胞可分化為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞，進(jìn)一步證實(shí)牙周膜干細(xì)胞具有多向分化能力。

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篇7

1. 初步學(xué)會(huì)觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的方法。

2. 理解植物細(xì)胞發(fā)生滲透作用的原理。

二、實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)細(xì)胞液的濃度小于外界溶液的濃度時(shí)，細(xì)胞液中的水分就透過原生質(zhì)層進(jìn)入外界溶 液中，使細(xì)胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定的收縮。由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁的收縮性大，當(dāng)細(xì)胞不斷失水時(shí)，原生質(zhì)層就會(huì)與細(xì)胞壁逐漸分離開，也就是分升了質(zhì)壁分離當(dāng)細(xì)胞液的濃度大于外界溶液的濃度時(shí)，外界溶液中的水分就透過原生質(zhì)層進(jìn)入細(xì)胞液中，整個(gè)原生質(zhì)層就會(huì)慢慢地恢復(fù)成原來的狀態(tài)，使植物細(xì)胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。

三、材料用具

紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、實(shí)驗(yàn)過程（見書P60）

物理實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ·實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式 ·實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板

五、討論

1．如果將洋蔥表皮細(xì)胞浸潤在與細(xì)胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？

篇8

無保護(hù)接生技術(shù)是指助產(chǎn)者不再向胎兒的頭部及會(huì)陰施加壓力， 減少醫(yī)療的干預(yù)， 但是在分娩過程中產(chǎn)婦易產(chǎn)生焦慮、緊張等不安心理情緒， 影響手術(shù)分娩的順利進(jìn)行， 對胎兒及產(chǎn)婦的生命安全構(gòu)成嚴(yán)重的威脅[1]。為降低產(chǎn)婦及新生兒的死亡率， 提高自然分娩率， 本院特分析會(huì)陰無保護(hù)接生技術(shù)的護(hù)理效果， 具體內(nèi)容報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年8月～2014年8月收集的3000例會(huì)陰無保護(hù)接生產(chǎn)婦， 隨機(jī)分對照組和觀察組， 各1500例。對照組年齡18～36歲， 平均年齡（24.25±3.92）歲。觀察組年齡19～35歲， 平均年齡（24.32±3.56）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：無產(chǎn)科嚴(yán)重并發(fā)癥、無分娩禁忌證、無語言聽力障礙。兩組產(chǎn)婦一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 護(hù)理措施 對照組產(chǎn)婦采用常規(guī)護(hù)理措施：向患者講解妊娠過程的有關(guān)知識， 教會(huì)產(chǎn)婦哈氣及屏氣；對產(chǎn)婦的產(chǎn)程進(jìn)行嚴(yán)密的觀察與監(jiān)護(hù)。觀察組產(chǎn)婦采用人文護(hù)理措施， 具體如下。

1. 2. 1 入院時(shí)護(hù)理 護(hù)士人員應(yīng)積極主動(dòng)的與患者進(jìn)行交流， 傾聽產(chǎn)婦的需求， 并盡量滿足產(chǎn)婦的合理要求， 根據(jù)產(chǎn)婦出現(xiàn)的心理問題進(jìn)行疏導(dǎo)， 消除產(chǎn)婦的顧慮；向產(chǎn)婦講解妊娠過程的有關(guān)知識及配合的重要作用， 護(hù)士人員在與產(chǎn)婦進(jìn)行交流過程中， 要有足夠的耐心， 與產(chǎn)婦建立良好的關(guān)系， 提高產(chǎn)婦的信任感及依賴感。

1. 2. 2 分娩時(shí)護(hù)理 保持分娩室的溫度及濕度， 根據(jù)產(chǎn)婦的情況可播放舒適的音樂；產(chǎn)婦分娩時(shí)護(hù)士人員應(yīng)陪伴在產(chǎn)婦的身邊， 囑咐產(chǎn)婦跟著護(hù)士的節(jié)奏用力；按摩產(chǎn)婦出現(xiàn)痙攣的部位， 緩解產(chǎn)婦的緊張情緒。

1. 2. 3 分娩后護(hù)理 縫合時(shí)告知產(chǎn)婦， 護(hù)士人員主動(dòng)與產(chǎn)婦進(jìn)行交流， 分散產(chǎn)婦的注意力。

1. 2. 4 產(chǎn)后護(hù)理 向產(chǎn)婦講解產(chǎn)后護(hù)理， 鼓勵(lì)產(chǎn)婦進(jìn)行適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)后體操運(yùn)動(dòng)， 教會(huì)產(chǎn)婦及家屬進(jìn)行新生兒沐浴、母乳喂養(yǎng)等。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察并記錄兩組產(chǎn)婦的會(huì)陰側(cè)切、會(huì)陰裂傷、新生兒鎖骨骨折、肩難產(chǎn)、產(chǎn)后出血情況， 并確保記錄結(jié)果準(zhǔn)確無誤。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

觀察組產(chǎn)婦會(huì)陰側(cè)切20例（1.33%）、會(huì)陰裂傷19例（1.27%）、新生兒鎖骨骨折10例（0.67%）、肩難產(chǎn)5例（0.33%）、產(chǎn)后出血6例（0.40%）；對照組產(chǎn)婦會(huì)陰側(cè)切190例（12.67%）、會(huì)陰裂傷100例（6.67%）、新生兒鎖骨骨折90例（6.00%）、肩難產(chǎn)120例（8.00%）、產(chǎn)后出血90例（6.00%）。觀察組產(chǎn)婦會(huì)陰側(cè)切率、會(huì)陰裂傷率、新生兒鎖骨骨折發(fā)生率、肩難產(chǎn)發(fā)生率、產(chǎn)后出血率明顯低于對照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

與傳統(tǒng)助產(chǎn)方式相比， 會(huì)陰無保護(hù)接生助產(chǎn)者不再向胎兒的頭部及會(huì)陰施加壓力， 減少醫(yī)療的干預(yù)， 從而降低會(huì)陰的側(cè)切率， 提高自然分娩率。但是在分娩的過程中， 產(chǎn)婦易產(chǎn)生焦慮、緊張等不安情緒， 引起機(jī)體代謝增加， 產(chǎn)婦因疼痛在叫喊過程中易致機(jī)體出現(xiàn)代謝性酸中毒， 影響子宮收縮， 不利于胎兒的順利產(chǎn)出[2]。

會(huì)陰側(cè)切術(shù)是一種創(chuàng)傷性操作， 與會(huì)陰的自然裂傷相比， 會(huì)陰側(cè)切術(shù)具有出血量較少、疼痛較輕、有利于傷口愈合等特點(diǎn)。人文護(hù)理模式主要以產(chǎn)婦為中心， 對產(chǎn)婦進(jìn)行人性化的關(guān)懷， 使產(chǎn)婦的生理、心理處于舒適的狀態(tài)， 減少產(chǎn)婦的不適感， 緩解產(chǎn)婦的心理壓力， 提高自然分娩率。由于對分娩知識的缺乏， 產(chǎn)婦會(huì)出現(xiàn)不同程度的緊張、恐懼等不安情緒， 易導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)代謝性酸中毒， 影響子宮的收縮， 不利于胎兒的順利產(chǎn)出[3]。產(chǎn)前通過對產(chǎn)婦進(jìn)行心理護(hù)理， 主動(dòng)與產(chǎn)婦進(jìn)行交流， 傾聽產(chǎn)婦的需求， 并盡量滿足產(chǎn)婦的合理要求， 根據(jù)產(chǎn)婦出現(xiàn)的心理問題進(jìn)行有效疏導(dǎo)， 與產(chǎn)婦建立良好的關(guān)系， 有利于緩解產(chǎn)婦的焦慮、緊張等情緒， 提高產(chǎn)婦的信任感。向產(chǎn)婦講解有關(guān)妊娠的相關(guān)知識及配合的重要性， 使產(chǎn)婦在術(shù)前做好思想準(zhǔn)備， 建立順產(chǎn)的信念， 減輕產(chǎn)婦的心理壓力， 提高依從性。在產(chǎn)婦分娩過程中護(hù)士人員應(yīng)陪伴在產(chǎn)婦的身邊， 鼓勵(lì)產(chǎn)婦， 通過按摩產(chǎn)婦出現(xiàn)的痙攣部位， 增加親切感， 減輕產(chǎn)婦的焦慮、緊張情緒， 以免分娩過快造成會(huì)陰撕裂等， 降低產(chǎn)婦的痛苦程度。在傷口縫合時(shí)動(dòng)作要輕、嫻熟， 通過與產(chǎn)婦進(jìn)行交流， 分散產(chǎn)婦的注意力， 給產(chǎn)婦及新生兒進(jìn)行保暖， 讓產(chǎn)婦感到溫暖。與常規(guī)護(hù)理措施相比， 人文護(hù)理模式注重產(chǎn)婦的人性關(guān)懷與照顧， 要求以影響最小， 痛苦最輕的方式， 對產(chǎn)婦進(jìn)行產(chǎn)前、產(chǎn)時(shí)、產(chǎn)后護(hù)理， 可有效減少產(chǎn)婦的不適感， 使產(chǎn)婦的生理、心理處于舒適的狀態(tài)， 緩解產(chǎn)婦出現(xiàn)的焦慮、緊張等不安心理情緒， 提高自然分娩率， 降低會(huì)陰側(cè)切的痛苦。

篇9

【關(guān)鍵詞】 分娩； 無保護(hù)會(huì)陰接生； 會(huì)陰裂傷；

會(huì)陰產(chǎn)傷的發(fā)生率是評價(jià)產(chǎn)科質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。對產(chǎn)婦而言，如何以痛苦最輕，影響最小的方式分娩是許多產(chǎn)科從業(yè)人員關(guān)心的重要問題，隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強(qiáng)，產(chǎn)婦及其家屬對產(chǎn)科質(zhì)量的要求也越來越高，采取有效的措施預(yù)防會(huì)陰產(chǎn)傷的發(fā)生，為患者提供安全的助產(chǎn)服務(wù)，具有重要的臨床意義和社會(huì)價(jià)值。無保護(hù)會(huì)陰接生的少干預(yù)理念，給產(chǎn)婦和胎兒一個(gè)自然低創(chuàng)的分娩模式，本院于2012年底開展這項(xiàng)助產(chǎn)新技術(shù)，本文通過回顧性分析無保護(hù)會(huì)陰接生與傳統(tǒng)托肛保護(hù)會(huì)陰接生法在會(huì)陰裂傷及第二產(chǎn)程時(shí)間、產(chǎn)后2 h出血量等方面進(jìn)行比較，探討無保護(hù)會(huì)陰接生的操作要點(diǎn)及臨床療效，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月-2013年3月本院采用無保護(hù)會(huì)陰接生產(chǎn)婦99例作為觀察組，患者年齡（27.49±2.90）歲，孕37～41周，同時(shí)選取同期分娩的采用傳統(tǒng)托肛法保護(hù)會(huì)陰產(chǎn)婦99例作為對照組，患者年齡（28.27±2.80）歲，孕37～41周，兩組產(chǎn)婦均為經(jīng)陰道分娩的足月、單胎、頭位初產(chǎn)婦。骨盆測量均在正常范圍，無會(huì)陰側(cè)切指征，無第二產(chǎn)程延長及胎兒宮內(nèi)窘迫，無妊娠期并發(fā)癥、產(chǎn)前通過產(chǎn)檢及B超排除巨大兒和生長受限兒等。

1.2 方法

1.2.1 觀察組 采用無保護(hù)會(huì)陰接生法，產(chǎn)婦臥于多功能電動(dòng)產(chǎn)床上，床尾抬高30°，呈半臥位，宮縮時(shí)產(chǎn)婦雙手抱膝屈曲，貼近腹部，臀部抬高2～3 cm，臀裂以下離開床面，指導(dǎo)產(chǎn)婦正確運(yùn)用腹壓，在宮宿間歇時(shí)停止，當(dāng)胎頭撥露3 cm左右時(shí)，根據(jù)情況準(zhǔn)備接生，待胎頭撥露至?xí)庴w后聯(lián)合緊張時(shí)單手開始控制露頭速度，同時(shí)不要有協(xié)助胎頭俯屈的動(dòng)作，不干預(yù)胎頭娩出角度和方向。建議著冠前不超過1 cm的娩出速度，雙頂徑娩出時(shí)，指導(dǎo)產(chǎn)婦均勻短暫用力，一般都可在宮縮時(shí)娩出，無需刻意協(xié)助仰伸，放棄傳統(tǒng)右手對會(huì)陰托壓的保護(hù)動(dòng)作，讓胎頭緩慢地以仰伸方式依次娩出頂骨、枕骨、額骨、鼻、口、頦。速度可較前略快，當(dāng)胎頭娩出后，擠凈口鼻黏液，不要急于讓胎肩娩出，耐心等待下一次宮縮，宮縮時(shí)雙手托住胎頭，產(chǎn)婦用力，盡量讓胎肩自然復(fù)位，娩出，最后勻速出胎體。

1.2.2 對照組 采用傳統(tǒng)的托肛法。胎頭撥露至需要保護(hù)會(huì)陰時(shí)，消毒會(huì)陰巾放于陰道口與皮膚之間，以右手拇指與其余四指分開，利用手掌大魚際肌及手腕部力量頂住會(huì)，宮縮時(shí)向上內(nèi)方托壓，間歇時(shí)保護(hù)會(huì)陰手稍放松.以免擠壓過久引起會(huì)陰水腫，保護(hù)會(huì)陰直至胎兒娩出[1]。

1.3 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 會(huì)陰裂傷評定標(biāo)準(zhǔn)：（1）會(huì)陰完整：會(huì)皮膚及陰道黏膜完整無裂傷；（2）Ⅰ度裂傷：會(huì)皮膚及陰道入口黏膜撕裂，未達(dá)肌層，一般出血不多；（3）Ⅱ度裂傷：指裂傷已達(dá)會(huì)陰體肌層，累及陰道后壁黏膜，甚至陰道后壁兩側(cè)溝向上撕裂，裂傷可不規(guī)則，出血較多；（4）Ⅲ度裂傷：裂傷向下擴(kuò)展，外括約肌斷裂[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組產(chǎn)婦會(huì)陰撕裂程度比較采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

3 討論

無保護(hù)會(huì)陰接產(chǎn)法是利用分娩機(jī)轉(zhuǎn)中胎頭枕骨以恥骨弓為支點(diǎn)的仰伸動(dòng)作，充分伸展以會(huì)陰體為核心的盆底組織，陰道口得以最大化，最后達(dá)到胎頭雙頂徑娩出的徑線，會(huì)陰整體的充分伸展與擴(kuò)張保護(hù)了會(huì)陰，減少了撕裂傷發(fā)生[3]。無保護(hù)會(huì)陰接產(chǎn)法近零俯屈的方式讓胎頭持續(xù)、緩慢仰伸，盆底的各肌肉束向外、向兩側(cè)呈放射性伸展，下方會(huì)陰體完全伸展變薄，兩側(cè)充分?jǐn)U張，胎頭的娩出壓力轉(zhuǎn)向恥骨，同時(shí)接生過程中強(qiáng)調(diào)半臥位分娩，旨在將骨盆出口充分打開，以最大徑線將胎兒娩出。上述資料中兩組均無Ⅲ度會(huì)陰裂傷，其中無保護(hù)會(huì)陰接生法6例會(huì)陰完整，會(huì)陰裂傷多為表淺傷，會(huì)陰裂傷程度和傳統(tǒng)會(huì)陰保護(hù)接產(chǎn)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

雖然分娩是生理過程，但是許多產(chǎn)婦并不能很好地調(diào)整自己心態(tài)，對分娩存在內(nèi)心恐懼和不安，情緒過于緊張，就會(huì)影響到整個(gè)產(chǎn)程進(jìn)展，從而造成難產(chǎn)，無保護(hù)會(huì)陰接生法中助產(chǎn)人員與產(chǎn)婦的溝通以及助產(chǎn)士的耐心尤為重要，應(yīng)該持續(xù)給予產(chǎn)婦心理及情感上的鼓勵(lì)，消除產(chǎn)婦的內(nèi)心恐懼感，宮縮間歇時(shí)應(yīng)與產(chǎn)婦溝通使其均勻用力，胎兒雙頂徑娩出后應(yīng)繼續(xù)指導(dǎo)產(chǎn)婦注意控制呼吸節(jié)奏。2篇國外的RCT 發(fā)現(xiàn)，助產(chǎn)士在分娩過程中幫助胎頭俯屈并保護(hù)會(huì)陰，不能減少會(huì)陰損傷，但可以減輕產(chǎn)后疼痛。一項(xiàng)多中心前瞻性RCT 發(fā)現(xiàn)，在納入的1076例產(chǎn)婦中，協(xié)助分娩組會(huì)陰裂傷的發(fā)生率為32.5%，不協(xié)助組為35.8%，其中Ⅲ度裂傷的發(fā)生率分別為2.7%和0.9%；協(xié)助分娩組會(huì)陰側(cè)切率為17.9%，不協(xié)助組為10.1%，新生兒結(jié)局兩組間比較則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[7]。另一項(xiàng)RCT納入5471例產(chǎn)婦，協(xié)助分娩組產(chǎn)后24 h疼痛的發(fā)生率為31.1%，不協(xié)助組為34.1%，會(huì)陰側(cè)切在不協(xié)助分娩組明顯減少，但手取胎盤的發(fā)生率增加[8]。

對兩組孕婦第二產(chǎn)程時(shí)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)際接產(chǎn)時(shí)，在胎頭即將著冠時(shí)，無保護(hù)會(huì)陰接產(chǎn)注重控制仰伸速度，講究單手控制防止露頭速度過快，產(chǎn)力均勻的情況下，提倡宮縮時(shí)娩出胎兒，使胎頭按頂骨、枕、額骨、面、下頦，依次娩出，同時(shí)復(fù)位、外旋轉(zhuǎn)，胎肩下降、娩出，對于產(chǎn)力過強(qiáng)的產(chǎn)婦，則于宮縮間歇期緩慢娩出，整個(gè)胎體的娩出幾乎都是一個(gè)自然而然的分娩過程，減少了人為手法干預(yù)的風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)防了產(chǎn)傷的誘因。一項(xiàng)RCT納入了252例采用硬膜外麻醉的孕婦，在其宮口開全后立即用力與休息后用力比較。宮口開全后休息后再用力能減少產(chǎn)婦用力時(shí)間，但對于胎兒的Apgar評分、臍帶血pH值、會(huì)陰損傷發(fā)生率、器械助產(chǎn)的使用率，兩者沒有差別[8]，無保護(hù)會(huì)陰接產(chǎn)沒有過快加速產(chǎn)程，也沒有刻意阻擋胎兒的娩出，而是讓分娩在胎兒和產(chǎn)道相互可適度的時(shí)限內(nèi)完成。

無保護(hù)會(huì)陰接產(chǎn)對于助產(chǎn)人員的培訓(xùn)要求、產(chǎn)科服務(wù)模式的轉(zhuǎn)變及與傳統(tǒng)接產(chǎn)理念的撞擊，尤其潛在的風(fēng)險(xiǎn)等影響因素還需要探索研究，無保護(hù)會(huì)陰接生操作方便，以產(chǎn)婦為中心，減少助產(chǎn)士頸椎、腰椎疲勞，避免職業(yè)病的發(fā)生，符合自然分娩、綠色分娩的理念[9]，會(huì)陰保護(hù)效果良好，值得臨床研究推廣。

參考文獻(xiàn)

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篇10

關(guān)鍵詞：植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生；就業(yè)現(xiàn)狀；分析原因；對策

近幾年來，關(guān)于大學(xué)生就業(yè)方面的研究，多是研究者從所在院校、地域入手，對其學(xué)生就業(yè)意向、就業(yè)創(chuàng)業(yè)現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)查研究，而以植物保護(hù)一級學(xué)科畢業(yè)生作為研究對象，統(tǒng)籌所有就業(yè)去向，按就業(yè)結(jié)構(gòu)差異進(jìn)行的調(diào)查和研究在省內(nèi)外均少有。本文以河北農(nóng)業(yè)大學(xué)為例，選取2010—2015年共6屆植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生作為調(diào)查對象,對他們的就業(yè)狀況進(jìn)行全面調(diào)查分析，數(shù)據(jù)來源于學(xué)生就業(yè)后向?qū)W校反饋的信息。通過整體統(tǒng)計(jì)與縱向比較,分析植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)整體情況與發(fā)展變化規(guī)律，旨在進(jìn)一步揭示畢業(yè)生就業(yè)難與用人單位用工荒的現(xiàn)實(shí)矛盾，破解植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)難題。

一、植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)現(xiàn)狀調(diào)查

調(diào)查顯示,河北農(nóng)業(yè)大學(xué)2010—2015年共6屆植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生的總體就業(yè)去向?yàn)榭佳?、農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣、公務(wù)員、科研院所等事業(yè)單位,各部分結(jié)構(gòu)現(xiàn)狀分布如下:第一，考研升學(xué)受到植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生的青睞。2010—2015年連續(xù)6年的河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生畢業(yè)去向情況調(diào)查結(jié)果（表1）顯示,畢業(yè)生就讀研究生人數(shù)平均占總畢業(yè)生的40.35%,遠(yuǎn)高于學(xué)校25%的平均水平，2011年升研率高達(dá)56.52%。表12010—2015年河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生畢業(yè)去向情況調(diào)查表第二，植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)結(jié)構(gòu)性矛盾突出。植物保護(hù)工作一線很難找到植保人才，偏遠(yuǎn)地區(qū)的植物保護(hù)生產(chǎn)企業(yè)更是無人問津，出現(xiàn)用工荒；與此同時(shí)，每年大量的植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生苦于不能找到滿意的工作，改投其他行當(dāng)。2010—2015年的調(diào)查結(jié)果顯示，本學(xué)科畢業(yè)生的就業(yè)人群中，從事植物保護(hù)相關(guān)工作的人數(shù)比例平均還不到30%，在植物保護(hù)工作一線的人數(shù)比例平均不及5%（表2）（工作一線率指真正下到農(nóng)村基層從事專業(yè)技術(shù)指導(dǎo)的人員，銷售人員除外）。第三，植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)面狹窄,就業(yè)方向單一。2010—2015年的調(diào)查結(jié)果如表3所示，本學(xué)科畢業(yè)生從事銷售工作的居于首位，從事公務(wù)員職業(yè)比例均值和從事教師職業(yè)的比例均值還不及3%（表3），雖然2014年從事教師職業(yè)的植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生比例達(dá)到8.25%，但整體比例依舊很低。第四，植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)穩(wěn)定性良好。根據(jù)國際上比較常用的方法，就業(yè)的穩(wěn)定性可以用一個(gè)人將一份工作保持6個(gè)月以上的可能性來衡量，具體計(jì)算時(shí)，可以用一個(gè)人曾經(jīng)做過的工作的平均持續(xù)時(shí)間或更換工作的次數(shù)來度量，就業(yè)穩(wěn)定性與就業(yè)質(zhì)量成正比。2010—2015年本學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)穩(wěn)定性情況調(diào)查結(jié)果如表4所示，結(jié)果表明連續(xù)六年來本學(xué)科畢業(yè)生一年內(nèi)跳槽的平均比率為12.20%。2013年本學(xué)科畢業(yè)生一年內(nèi)的跳槽率最高，為14.13%。

二、植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)現(xiàn)狀分析

第一，研究生擴(kuò)招的陽光政策和為使自身就業(yè)競爭價(jià)值提升使得植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生把考研升學(xué)作為首選。植物保護(hù)學(xué)科是農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)立較早的學(xué)科之一,是河北省強(qiáng)勢特色學(xué)科，其畢業(yè)生就業(yè)主要集中在農(nóng)業(yè)推廣、農(nóng)業(yè)教學(xué)和科研院所等單位,但是自我國1993年實(shí)行畢業(yè)生就業(yè)制度改革和1999年進(jìn)行高校大擴(kuò)招以來，植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)形勢不容樂觀。植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生把就讀研究生作為畢業(yè)后首要選擇，增加了自身在就業(yè)市場上的砝碼，緩解了眼前的就業(yè)壓力，通過繼續(xù)讀研深造的方式贏得更好的未來。此外，研究生擴(kuò)招的陽光政策，讓更多學(xué)生能夠接受進(jìn)一步的高等教育，增加了提升人力資本的機(jī)會(huì)。第二，傳統(tǒng)的就業(yè)觀念制約了畢業(yè)生選擇到農(nóng)村去發(fā)展。植物保護(hù)專業(yè)與“農(nóng)”密不可分，但提到農(nóng)業(yè)就被認(rèn)為是弱質(zhì)產(chǎn)業(yè)，提到扎根基層就認(rèn)為條件艱苦，面朝黃土背朝天，收入又少，“輕農(nóng)”思想或多或少使植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生不愿意擇農(nóng)。另外，植物保護(hù)學(xué)科學(xué)生大多來自農(nóng)村，而高校主要分布在城市，在城市多年的學(xué)習(xí)與生活，使農(nóng)科畢業(yè)生很難做出回家務(wù)農(nóng)的決定。第三，當(dāng)今社會(huì)對農(nóng)科專業(yè)的偏見,以及對“農(nóng)”字的誤解,造成了農(nóng)科畢業(yè)生就業(yè)的尷尬。社會(huì)環(huán)境中存在的“輕農(nóng)”“棄農(nóng)”思想和并不成熟的都市化農(nóng)業(yè)體系，直接影響到大學(xué)生的思想觀念、價(jià)值取向、就業(yè)觀念等諸多方面。社會(huì)上大部分工作崗位都是要求有豐富的工作經(jīng)驗(yàn)，而銷售入門門檻很低，相對于其他職業(yè)崗位來說，可以在短時(shí)間之內(nèi)獲得成就感以及相對豐厚的回報(bào)，這些因素導(dǎo)致畢業(yè)生往往把從事銷售行業(yè)作為就業(yè)的最佳選擇。雖然考取公務(wù)員是畢業(yè)生從政的階梯，但是能夠走上公務(wù)員這條路的往往是成績優(yōu)秀，在校期間積極參加各項(xiàng)社會(huì)活動(dòng),綜合素質(zhì)高、能力強(qiáng)的學(xué)生，高要求、高門檻以及有限的職位導(dǎo)致公務(wù)員就職率一直偏低。第四，用人單位與畢業(yè)生之間的勞動(dòng)關(guān)系決定了二者之間的聯(lián)系較為松散。目前植保學(xué)科畢業(yè)生所在的農(nóng)資生產(chǎn)經(jīng)營企業(yè)人員流動(dòng)大，企業(yè)與畢業(yè)生之間簽署的是勞動(dòng)合同，畢業(yè)生的檔案關(guān)系、社會(huì)保險(xiǎn)、工齡續(xù)接、黨員關(guān)系等事宜均有人才機(jī)構(gòu)辦理，這樣的管理方式減輕了畢業(yè)生的后顧之憂，但同時(shí)也讓畢業(yè)生與企業(yè)之間的聯(lián)系更為簡單與直接，畢業(yè)生的歸屬感不強(qiáng)及崗位的不確定性增加。因此，為更好地解決植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生就業(yè)供需矛盾，一是國家要繼續(xù)完善基層相關(guān)優(yōu)惠政策吸引植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生服務(wù)于新農(nóng)村建設(shè)，消除植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生到基層就業(yè)的體制性和機(jī)制，給大學(xué)生提供完善的社會(huì)保障體系；另外在農(nóng)村政治、文化、教育等工作領(lǐng)域應(yīng)讓植物保護(hù)學(xué)科畢業(yè)生擔(dān)任一定的職務(wù),為他們的成才提供服務(wù)平臺。二是應(yīng)強(qiáng)化社會(huì)輿論的宣傳，營造鼓勵(lì)支持植物保護(hù)學(xué)科大學(xué)生服務(wù)“三農(nóng)”、扎根基層的良好氛圍。三是高校要突出植物保護(hù)學(xué)科特色，拓寬專業(yè)口徑，通過生產(chǎn)實(shí)踐、教學(xué)實(shí)習(xí)、企業(yè)實(shí)習(xí)鍛煉等多種方式不斷加強(qiáng)植物保護(hù)學(xué)科學(xué)生的專業(yè)知識和專業(yè)技能，突出人才培養(yǎng)應(yīng)用性、技藝性、操作性的特色。四是大學(xué)生要努力提高自身綜合素質(zhì)，樹立正確擇業(yè)觀念，要志存高遠(yuǎn)，腳踏實(shí)地，轉(zhuǎn)變傳統(tǒng)就業(yè)觀念，勇于到基層一線和艱苦地方去，善于在平凡崗位上創(chuàng)造不平凡的業(yè)績。

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